ELISA酶联免疫反应实验检测服务简介

ELISA是指以酶作为标记物、以抗原和抗体之间免疫结合反应为基础的固相吸附测定方法。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

按试剂盒说明书进行操作，不同指标操作不一样。具体以订购的试剂盒说明书为准。基本步骤如下：

　　1.包被：用碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1-10μg/ml。在聚苯乙烯酶标板的每孔加100μl，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min。(一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，此步骤可省略)

　　2.封闭：每孔加入200ul封闭液，37℃或室温孵育1-2 h。

　　3.洗涤：小心揭掉封板膜，放入洗板机，洗涤3-5遍。也可以手动洗板：弃去液体，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水纸上拍干，重复3-5遍。(一般商品化的试剂盒中已包被好抗体，前三个步骤可省略)

　　4.加样：加适当稀释的待检样品100μl于上述已包被的反应孔中。(同时做空白孔，倍比稀释的标准品孔，有条件可加做阴性对照孔及阳性对照孔作为质控点)。

　　5.温育：用封板膜封板后置37℃孵育1-2 h。

　　6.洗涤：同步骤3。

　　7.加抗体：于各孔中加稀释好的生物素化抗体工作液100 μl。

　　8.温育：用封板膜封板后置37℃孵育1 h。

　　9.洗涤：同步骤3。

　　10.加酶结合物：于各孔中加稀释好的酶结合物工作液100 μl。

　　11.温育：用封板膜封板后置37℃避光孵育30 min。

　　12.洗涤：同步骤3。

　　13.加显色底物：于各孔中加入TMB底物溶液100 μl，37℃避光反应10～30min，直到倍比稀释的标准品孔出现明显的颜色梯度为止。

　　14.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸100 μl，颜色由蓝色变为黄色。

　　15.结果测定：10min内，在酶标仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。

ELISA酶联免疫反应实验检测服务内容

客户须知 
ELISA试剂盒自备（建议定购*试剂盒，也可委托我们代购）。

实验周期

7个工作日内（具体实验周期视实验方案而异）

服务承诺

提供实验方法、步骤、所用试剂、仪器及相关分析数据。