流式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书
一、 实验仪器与试剂
表格一:实验仪器
仪器 | 厂家 | 型号 |
细胞培养箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
低温高速离心机 | 64R | BECKMAN |
流式细胞仪 | BD | FACS Calibur |
表格二:试剂
试剂 | 厂家 |
DMEM 培养液 | Hyclone |
胎牛血清 | Gibco |
无钙、镁 PBS 7.4 (0.1 M) | 自配 |
Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒 | BD |
二、 实验步骤
细胞培养 取对数生长期的 A172 细胞,按 1*105个/mL 以 1mL 体积接种于 6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到 70%的汇合率。
转染
将 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均匀。
将 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均
匀。在室温下孵育 5 分钟。
将上述两种混合物混合(总体积 800uL),轻轻混合均匀在室温下孵育
20 分钟形成复合物。
在 6 孔板中每孔加入 800uL 复合物。十字法混合均匀。
细胞在 37℃、5%CO2培养箱中培养 6h 后弃上清液,并加入 10%胎牛血
清的 DMEM 培养液。
染色 消化并离心收集细胞(1000rpm/min)后弃上清,加入无钙、镁 PBS 1mL 洗
2 次,离心后弃上清。分别加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC 和 5μL
PI 溶液,室温避光孵育 15min。
4. 检测
加入 400μL binding buffer 后以标准程序用流式细胞仪检测,汞激发波长
488nm,计数 1 万个细胞。
三、 实验结果
省略